Porphyrinogen carboxylyase. Studies on existence of isoenzymes

Porphyrinogen carboxylyase from normal rat liver was subjected to purification methods. Two different purification protocols were used. In both cases, the inital steps consisted in obtaining a liver homogenate, followed by centrifugation, salt precipitation and phosphate gel absorption. Scheme I consisted in then submiting the preparation to DEAE-cellulose, followed by Sephacryl S-200 and Phenyl-sepharose sequential column chromatographies. Scheme II involved an affinity column followed by a Sephadex G-75 gel filtration column. In both cases, the enzyme was stored at-20 degrees Celsius until its assay. The addition of 2mM dithiotreytol to the incubation media or to the enzyme extract before storage, did not help improve the activity nor the stability of the enzyme. Those fractions containing the maximal enzyme activity, detected using Uroporphyrinogen III or Pentacarboxy-porphyrinogen III as substrate, were not alawys present in the same tubes for the different columns employed. In addition, the degree of purification obtained in some steps was different according to the substrate employed. The results suggest the existence of at least two isoenzymes for rat liver porphyrinogen carboxy-lyase.

Evaluacion de la capacidad de la desferrioxamina para revertir una severa porfiria inducida por hexaclorobenceno / Evaluation of desferrioxamine capacity to revert a severe porphyrid induced by hexachlorobenzene

El objeto del presente trabajo es investigar la capacidad de la desferrioxamina (DF) como quelante de hierro para disminuir o revertir una porfiria experimental severa inducida por hexaclorobenceno (HCB) en ratas. La DF se comienza a administrar después de 17 semanas de intoxicación con HCB y se continúa hasta la semana 27. Se cuantifican semanalmente excreciones en orina de ácido aminolevúlico (ALA), profobilinógeno y porfirinas. Al final del experimento se sacrifican los animales y se determinan porfirinas hepáticas y actividad de ALA sintetasa y porfirinógeno carboxi-liasa. Los resultados indican que el quelante adminsitrado no mejora el disturbio provocado por el HCB sobre el camino metabólico del hemo en las presentes condiciones. Se comparan estos resultados con los obtenidos cuando la DF se da conjuntamente con el HCB desde el comienzo de la administración del fungicida, situación en que sí el quelante retarda y atenúa el efecto porfirinogénico del HCB. Se discute el papel del hierro en la metabolización del HCB

Evaluación de la capacidad porfirinogénica del lindano en ratas / Evaluation of porphyrinogenic effect of lindane in rats

Se quiso evaluar la capacidad porfirinogénica del lindano en ratas, para lo cual se trataron los animales durante aproximadamente 3 meses con el pesticida disuelto por medio de Tween o en aceite, y se determinó semanalmente a lo largo del tratamiento la excreción urinaria de porfirinas y precursores: ácido rô-aminolevulínico (ALA) y porfobilinógeno (PBG), y la excreción fecal de coproporfirina (COPRO) y protoporfirina (PROTO). Al cabo del tratamiento se determinaron las actividades hepáticas de: ALA-Sintetasa (ALA-S), enzima primera y regulatoria del camino biosintético de las porfirinas y el hemo, y porfirinógeno carboxiliasa (PCL) enzima de descarboxila secuencialmente el uroporfirinógeno (8COOH) para dar coproporfirinógeno (4 COOH). El lindano produjo ligeros aumentos de la excreción urinaria tanto de precursores como de porfirinas, siendo este último parámetro el más afectado. También se encontró aumentada la excreción de COPRO y PROTO en heces. En cambio, no se alteró la actividad de ALA-S, lo que sugiere que los disturbios hallados no afectan el "pool" regulatorio de hemo. Tampoco se vio alterada la actividad de PCL pese a ser esta enzima el blanco de ataque de otros compuestos clorados. Por lo tanto, el lindano, pese a estar químicamente relacionado y producir metabolitos comunes con el hexaclorobenceno (HCB), un conocido agente porfirinogénico, produce una alteración del camino biosintético del hemo y cualitativamente diferente,. Esto podría estar relacionado con la ausencia o escasa formación del metabolito reactivo responsable de los efectos del HCB

The role of iron in the hexachlorobenzine induced porphyria: I. Studies on diferent types of iron and its relation with porphyrinogen carboxy-lyase decrease

Se llevaron a cabo estudios para elucidar si en la porfiria por hexaclorobenceno (HCB) están alterados los contenidos de hierro total, no hémico en hígado y si existe alguna relación entre estas alteraciones y el decrenento de la porfirinógeno carboxi-liasa (PCL) hepática en ratas tratadas con la droga. Se observó que en los hígados porfíricos los niveles de hierro total y no hémico incrementaron significativamente como consecuencia de la intoxicación por HCB, mientras que este tratamiento produjo un decremento no significativo en el contenido de hierro hémico. Preparaciones enzimáticas de hígados porfíricos filtradas a través de columnas de Sephadex G-25, que separan el hierro libre y que tienen un contenido de hierro-proteína mayor que las normales, exhibieron una fuerte inhibición de PCL. Agentes quelantes, alfa alfa' bipiridilo y 8-hidroxiquinolina, no revierten tal inhibición. Se ensayó también el efecto in vitro de diferentes concentraciones de hierro inogánico, ferritina y hemina sobre la actividad de PCL normal. Así se observó que hierro inogánico y hemina producen ligera inhibición de PCL cuando se añaden en concentraciones mayores que las correspondientes a un hígado porfírico (0.08 mM y 10-6 M respectivamente como promedio en el medio de incubación). Por lo tanto dichas inhibiciones no tienen significado fisiológico. La ferritina no modifica el proceso de descarboxilación. De estos resultados surge que el hierro no desempeña un papel directo en el decremento de la actividad PCL en la porfiria experimental por HCB, no siendo el inhibidor que se pone de manifiesto en los ensayos de calentamiento. El hierro podría quizás estimular la metabolización del HCB dando origen a metabolitos activos